蛋白印跡實驗封閉蛋白選哪種，牛奶或 BSA？

脫脂奶粉或牛血清白蛋白 (BSA) 會如何影響你的蛋白印跡結果。

關于蛋白印跡 WB 實驗，我們常遇到一個問題，我該用什么來封閉，牛奶或 BSA？

首先，我們需要了解封閉的目的：減少因非特異性結合而產生的背景。其次，我們需要知道 BSA 和牛奶的區(qū)別：BSA 僅由一種蛋白組成，即 60 kDa 的牛血清白蛋白；而牛奶則由許多大小不一的蛋白構成。

所以，CST (Cell Signaling Technology) 推薦牛奶封閉最佳，因為牛奶有更大的機會來減少更多的非特異性結合。我們建議您用經 TBST 稀釋的 5% 牛奶，在室溫下搖晃一小時，來封閉CST所有非偶聯一抗，這包括磷酸化特異性和總抗體。

現在，曾有同學問過，“牛奶中的磷酸酶會怎么樣？” 或許有一些文章反對使用牛奶來檢測磷酸化信號，這一誤區(qū)的出現可能是由于實驗者使用了非實驗級奶粉引起的（國內許多奶粉含有磷酸酶等雜質），但在 CST 的所有內部檢測中，科學家們進行了多次蛋白印跡實驗，從未發(fā)現任何這樣的問題。CST建議轉膜后迅速在TBS中洗滌膜幾秒，以便移除殘留的轉膜緩沖液，隨后使用5%脫脂牛奶（請使用實驗級的#9999）的TBST室溫封閉1h。另外，CST科學家們每天至少要新鮮配制一次牛奶，有時甚至一天配制多次，因為如果牛奶緩沖液放置了一周、兩周甚至更長時間不使用，那么磷酸酶影響信號的機率將會增加。

上圖是(Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP??Rabbit mAb)?#13038 用來檢測經 PDGF 處理的 3T3 細胞裂解物的結果圖片。左側膜是用牛奶封閉，右側膜用 BSA 封閉。顯然，用 BSA 封閉的膜的背景更高。但用牛奶封閉膜時，磷酸化信號仍然很強且清晰。

封閉后，請仔細查看一抗的說明書，根據推薦的一抗緩沖液來稀釋一抗，一般推薦牛奶或 BSA，但取決于不同抗體。

希望本篇講述的實驗細節(jié)對您的實驗有所幫助。全部特定應用的實驗步驟可在 cst-c.com.cn 具體產品頁上找到。如果你有任何其他技術問題，請郵件聯系tech@cst-c.com.cn，或可撥打全國免費技術熱線：4006-GreatQ（473287）。

本來來自 CST中國 CST博士互助平臺